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		新興的體外診斷技術(shù)熒光原位雜交

　　熒光原位雜交（FISH）是一種新興的體外診斷技術(shù)非常復(fù)雜的生物標(biāo)本 - 如血液，羊水，和實(shí)體瘤 - 遺傳異常的臨床評(píng)價(jià)和表征。魚類病理學(xué)家和遺傳學(xué)家的特殊價(jià)值，促進(jìn)廣泛的分子遺傳事件，如非整倍體，基因擴(kuò)增，基因缺失，染色體易位，是很難檢測(cè)，染色體核型分析，PCR或LCR的表征。魚為主的體外診斷有可能顯著提高癌癥患者的生存可能早期發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤和腫瘤手術(shù)后的更準(zhǔn)確的預(yù)后評(píng)估。魚體外診斷也可以適用于產(chǎn)前和產(chǎn)后的遺傳分析。此外，該技術(shù)是特別有用的單個(gè)單元中的同時(shí)檢測(cè)多個(gè)基因的異常，有可能節(jié)省分析時(shí)間，并限制試樣的要求。

　　魚用核酸探針 - 段標(biāo)記的DNA綁定，或“雜交”的標(biāo)本的DNA與目標(biāo) - 通常固定在玻片。與熒光分子標(biāo)記的探針，通過(guò)使用熒光顯微鏡的探針 - 靶雜交未能識(shí)別。混合動(dòng)力進(jìn)一步分析與計(jì)算機(jī)成像設(shè)備。由于兩個(gè)互補(bǔ)的DNA鏈之間發(fā)生雜交，標(biāo)記的探針可用于檢測(cè)遺傳異常，產(chǎn)前紊亂，癌癥和其他遺傳疾病提供有價(jià)值的信息。與其他分子的DNA為基礎(chǔ)的測(cè)試，這需要細(xì)胞裂解釋放的核酸進(jìn)行分析，F(xiàn)ISH原位允許的DNA分析，也就是在其原生，細(xì)胞核內(nèi)的染色體的形式。該屬性允許單個(gè)細(xì)胞的染色體和基因的分析。

　　魚的一個(gè)關(guān)鍵優(yōu)勢(shì)是它的能力為目標(biāo)，只有那些感興趣的基因序列。1986年，喬·格雷博士丹Pinkel，博士，同時(shí)在勞倫斯·利弗莫爾實(shí)驗(yàn)室，發(fā)現(xiàn)適當(dāng)?shù)姆忾]魚使用克隆的人類基因或獨(dú)特的DNA序列區(qū)域的DNA序列，列入抑制穿插重復(fù)DNA序列雜交（所以所謂的“垃圾DNA”）散落在整個(gè)基因組。這種抑制在很大程度上消除了非特異性信號(hào)。這一發(fā)現(xiàn)是由美國(guó)加州大學(xué)的專利獨(dú)家許可Vysis公司（伊利諾斯Downers Grove）。

　　直接由共價(jià)結(jié)合的探針的熒光團(tuán)標(biāo)記的DNA探針的發(fā)展進(jìn)一步簡(jiǎn)化的技術(shù)：舊的檢測(cè)方法依賴于標(biāo)記的探針-靶DNA雜間接結(jié)合的信號(hào)產(chǎn)生基團(tuán)（如異硫氰酸熒光素FITC]抗生物素蛋白）無(wú)信號(hào)產(chǎn)生的DNA探針上的配位體（如生物素）（圖1）。間接方法是更復(fù)雜的，需要額外的步驟，往往有更多的非特異性信號(hào)，由于異硫氰酸熒光素-親和素復(fù)合物的固有粘性的。例如，在最近的研究中，測(cè)量HER-2/neu在乳腺癌標(biāo)本的擴(kuò)增，直接標(biāo)記和間接標(biāo)記的探針的比較發(fā)現(xiàn)了一個(gè)方法率99.3％的速度相比，與直接標(biāo)記的探針只有79.7％的間接標(biāo)記的探針。1因此，Pinkel和灰色發(fā)明的直接標(biāo)記的探針的組合，有可能成為一種常規(guī)的技術(shù)，染色體異常的臨床鑒定FISH。

　　詞匯表α-衛(wèi)星DNA：約171個(gè)堿基對(duì)的序列，發(fā)現(xiàn)在每個(gè)人染色體的著絲粒區(qū)域的不同副本的串聯(lián)陣列。非整倍體：一個(gè)正常的染色體，較少量的（單體性）或更高（例如，三體綜合征[3]）比正常的偏離?，F(xiàn)場(chǎng)計(jì)數(shù)：計(jì)數(shù)的獨(dú)特的熒光信號(hào)，或“斑點(diǎn)”，所產(chǎn)生的特定的染色體雜交時(shí)的α衛(wèi)星地區(qū)的FISH探針。

　　程序;魚，用直接標(biāo)記的探針，是一個(gè)簡(jiǎn)單的程序，包括六個(gè)基本步驟（圖2）。樣品前處理，第一個(gè)步驟，它涉及到與靶DNA序列變性結(jié)束。接著，對(duì)探針施加到目標(biāo)區(qū)域，目標(biāo)DNA和探針雜交。目標(biāo)雜交后，洗滌以除去非特異性結(jié)合的探針。最后，染液施加雜交的結(jié)果的可視化。

　　在這樣一種方式，該探針具有與靶DNA樣本的形態(tài)被保留時(shí)，必須將樣品制備。組織類型，固定，樣品嵌入過(guò)程影響變性前的預(yù)處理必要的類型。對(duì)于淋巴細(xì)胞，簡(jiǎn)單的變性條件下，如高溫和低的鹽或堿，是足夠的。福爾馬林固定的石蠟包埋組織，但需要更多的步驟，包括脫蠟和酶和/或化學(xué)處理，以使探針與靶DNA。雜交和洗參數(shù)是相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)的，但在某些試驗(yàn)中，必須改變以適應(yīng)某些探針的復(fù)雜性和特殊性。

　　使用五彩探頭可同時(shí)檢測(cè)多個(gè)基因魚在一個(gè)單一的核事件。甲更大數(shù)量的熒光基團(tuán)，可以在直接標(biāo)記的探針一起使用，比在間接標(biāo)記的探針。2 Multievent篩選能識(shí)別檢體的克隆性質(zhì)以及中期和間期細(xì)胞中的染色體重排。此外，允許列入探針雜交的控制位點(diǎn)（與測(cè)試位點(diǎn)），同時(shí)目標(biāo)檢測(cè)，可以提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性。使用這些探針，它可以監(jiān)視每個(gè)細(xì)胞核內(nèi)雜交的成功或失敗。

　　有幾種方法，multievent在FISH檢測(cè)。2一種方法是使用標(biāo)記的探針雜交中檢測(cè)到的每個(gè)目標(biāo)用不同的光譜上不同的熒光基團(tuán)。通過(guò)使用此方法至少有7個(gè)不同的染色體上已被同時(shí)檢測(cè)到2的另一種方法，稱為顏色編碼，單獨(dú)和組合使用不同的熒光團(tuán)比用于標(biāo)記探針的熒光團(tuán)的數(shù)目，找出染色體目標(biāo)3通過(guò)結(jié)合熒光團(tuán)2 N 1的目標(biāo)，可以檢測(cè)到（N =熒光標(biāo)簽）。

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