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		克服靈敏度限制橫向流動(dòng)免疫分析標(biāo)記技術(shù)

　　免疫分析測(cè)試，利用一種抗體的特異性結(jié)合抗原。免疫學(xué)技術(shù)的主要特點(diǎn)是適當(dāng)?shù)臉?biāo)記的抗體或抗原。這個(gè)標(biāo)簽可以創(chuàng)建一個(gè)信號(hào)，與免疫反應(yīng)并允許感興趣的分析物的檢測(cè)。在實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)中，各種洗滌步驟需要除去游離的標(biāo)記或未標(biāo)記的反應(yīng)物和允許的范圍和標(biāo)記的反應(yīng)物的分析物的檢測(cè)。試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行校準(zhǔn)曲線比較，量化。

　　相反，著名的橫向流動(dòng)免疫分析（lfias），如懷孕測(cè)試，不需要洗滌步驟。在側(cè)流試驗(yàn)系統(tǒng)，抗原抗體反應(yīng)，以及過(guò)量的反應(yīng)物的去除，通過(guò)色譜分離發(fā)生。檢測(cè)試劑（例如，標(biāo)記抗體）和樣品吸液芯通過(guò)測(cè)試條片或膜。在捕獲線，檢測(cè)試劑與捕捉劑的相互作用，它已被固定在膜。試驗(yàn)結(jié)果是視覺(jué)評(píng)估，通常由兩個(gè)線的測(cè)試線和控制線。

　　與其它免疫分析格式的lfias相比，主要優(yōu)點(diǎn)是使用方便；除了分配的樣品，沒(méi)有額外的處理步驟通常是必要的。因此，lfias可以通過(guò)nontrained用戶和現(xiàn)場(chǎng)使用過(guò)程中樣品的采集容易。測(cè)試的簡(jiǎn)單，搭配他們的快速返回的結(jié)果（2–15分鐘），這意味著測(cè)試的成本效益。

　　盡管有這些優(yōu)點(diǎn)，lfias往往局限于篩選中的應(yīng)用。這是因?yàn)閘fias，在其目前的形式，是不容易量化，不適合某些應(yīng)用是足夠敏感。本文將研究橫向流敏感性的相關(guān)問(wèn)題，探討特殊的標(biāo)記方法可以克服格式的局限性。

　　標(biāo)記方法第一個(gè)方法是在20世紀(jì)50年代末進(jìn)行的。他們被歸類為放射免疫測(cè)定法，使用同位素131I，其高靈敏度增加測(cè)試時(shí)間，作為一個(gè)標(biāo)簽。1要執(zhí)行這些類型的測(cè)試，閃爍體組成和防護(hù)設(shè)備的要求。作為一個(gè)結(jié)果，現(xiàn)場(chǎng)測(cè)試是不可行的。即使如此，在20世紀(jì)70年代后期，固相免疫分析131I作為標(biāo)記開(kāi)發(fā)。2該測(cè)試系統(tǒng)，這是在一個(gè)流動(dòng)裝置進(jìn)行通信，可以被認(rèn)為是一個(gè)現(xiàn)代的側(cè)流技術(shù)的先驅(qū)。

　　在上世紀(jì)80年代，出現(xiàn)的酶標(biāo)簽。這些高度敏感的測(cè)試可能不需要廣泛的安全要求。3今天，我們不能想象沒(méi)有這樣的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）免疫指標(biāo)分析。在一般情況下，過(guò)氧化物酶標(biāo)記免疫試劑用于這些測(cè)試，和信號(hào)是通過(guò)添加適當(dāng)?shù)牡孜锶芤汉螽a(chǎn)生免疫反應(yīng)。信號(hào)強(qiáng)度可以測(cè)量光度法和它與校準(zhǔn)曲線比較量化。膜為基礎(chǔ)的檢測(cè)，另一方面，堿性磷酸酶標(biāo)簽通常是由于底物轉(zhuǎn)化產(chǎn)生的顏色視覺(jué)可以檢測(cè)。4然而，結(jié)果通常是難以量化的。在理論上，它可以使用酶標(biāo)記lfias，但是開(kāi)發(fā)一個(gè)可讀的顏色所必需的過(guò)程是不可行的在實(shí)驗(yàn)室外。

　　熒光和化學(xué)發(fā)光免疫分析也得到了發(fā)展，以及適當(dāng)?shù)淖x者。雖然這些標(biāo)記技術(shù)可用于lfias，復(fù)雜而昂貴的檢測(cè)設(shè)備的要求限制了這種測(cè)試市場(chǎng)。同使用順磁性顆粒作為標(biāo)簽是真的。

　　為lfias，標(biāo)簽如膠體金，碳粒子，或乳膠珠，使視覺(jué)檢測(cè)沒(méi)有額外的讀者，被使用，但與酶的底物轉(zhuǎn)化的標(biāo)簽，無(wú)增強(qiáng)效應(yīng)是可能的。因此，由于抗體粒子的比例相對(duì)較高，只有較低的靈敏度是這樣的標(biāo)簽了。

　　局限性與其它免疫分析，一個(gè)lfia靈敏度的測(cè)試中使用的抗體的親和力的影響。在最佳生理?xiàng)l件下，一種抗體的親和常數(shù)是有價(jià)值的，不能被改善時(shí)，負(fù)責(zé)測(cè)試的靈敏度。這是不變的情況下，生化抗體。然而，如果抗體標(biāo)記，這可能導(dǎo)致的空間位阻的限制，造成改變，甚至完全喪失，親和力。5

　　生化指示標(biāo)簽，如酶或熒光團(tuán)，通常使用的抗體的主要結(jié)構(gòu)的賴氨酸殘基的反應(yīng)性氨基。如果這種共軛影響抗體的親和力，標(biāo)簽可以采用羧基谷氨酸或天冬氨酸殘基。6在無(wú)標(biāo)記如金的情況，可能會(huì)有一些抗體的親和力下降。因此，最佳標(biāo)記條件必須憑經(jīng)驗(yàn)確定。然而，需要注意的是，許多抗體的重要，當(dāng)使用視覺(jué)標(biāo)記的方法，不提供必要的高親和力常數(shù)（即使未標(biāo)記的）需要滿足所需的各種分析物的檢測(cè)限為。

　　除了抗體的親和力，有大量的其他條件可能會(huì)限制免疫測(cè)定法的靈敏度。7除了樣本矩陣和抗體標(biāo)記，膜或墊可以對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響。在硝酸纖維素膜上，例如，芯吸速率在測(cè)試過(guò)程中起著關(guān)鍵的作用。一般而言，較高的芯吸率，靈敏度較低，尤其是當(dāng)使用具有低親和常數(shù)的抗體。

　　的靈敏度也可以通過(guò)測(cè)試的設(shè)計(jì)問(wèn)題，如膜厚度的影響，膜的預(yù)處理，并對(duì)固定化和標(biāo)記的反應(yīng)物的濃度。這意味著，例如，這一損失由于膜問(wèn)題的靈敏度可以通過(guò)增加的固定化抗原濃度對(duì)膜和標(biāo)記抗體的補(bǔ)償。然而，這通常需要增加試劑的體積，因此，增加的成本。這也可能導(dǎo)致的損失的特異性和較高的檢測(cè)背景。

　　雖然許多不同的lfias已被開(kāi)發(fā)，濫用檢測(cè)妊娠試驗(yàn)和藥仍然是最常見(jiàn)的和眾所周知的。一個(gè)很好的理由，這些流行的測(cè)試中經(jīng)常使用的尿液樣本矩陣。由于它的鹽含量和中性pH值，尿提供了幾乎最優(yōu)條件穩(wěn)定性和親和力抗體。如血液或唾液復(fù)雜的矩陣也提供生理鹽和pH值條件下，但也含有高量的蛋白質(zhì)，脂類，和多糖。這些物質(zhì)可以與實(shí)驗(yàn)室樣品制備方法分離，但現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)，對(duì)樣品制備的需要，應(yīng)保持在最低限度。

　　另一種是特殊的樣品墊，可以去除干擾物質(zhì)的使用。用于食品和環(huán)境樣品的測(cè)試，在更大的樣本的純度是必要的，特殊的緩沖條件必須創(chuàng)造必要的生理?xiàng)l件下的測(cè)試。為了實(shí)現(xiàn)這些是通過(guò)稀釋樣品緩沖液中的最簡(jiǎn)單的方法。然而，這樣做，也往往沖淡分析的興趣，導(dǎo)致虧損的靈敏度。

　　在克服lfias靈敏度的限制，還需要搭配不同的測(cè)試組件。除此之外，因?yàn)榭贵w的親和力是有限的，一個(gè)測(cè)試的靈敏度可以增加通過(guò)使用不同的標(biāo)簽。用于熒光，新的和高度敏感的讀者發(fā)光的發(fā)展，或順磁性標(biāo)簽已經(jīng)創(chuàng)造了新的機(jī)會(huì)。但這些測(cè)試往往是更昂貴，由于規(guī)模和復(fù)雜性的讀者，是有限的現(xiàn)場(chǎng)測(cè)試。

　　實(shí)現(xiàn)更強(qiáng)的信號(hào)，另一種方法是增加抗體的標(biāo)記密度。以下描述的熒光標(biāo)記的光學(xué)讀取immunodipstick法（佛羅里達(dá)州）技術(shù)，一種新型的熒光標(biāo)記方法，顯示了一個(gè)高達(dá)三個(gè)數(shù)量級(jí)的靈敏度增加相對(duì)于傳統(tǒng)側(cè)流標(biāo)記方法可以同時(shí)仍然能夠以一個(gè)簡(jiǎn)單的檢測(cè)結(jié)果，手提燈。

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