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| BART發(fā)光的分子診斷概述 | |||||||||||
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BART是一個發(fā)光的分子診斷，可以減少儀器的成本和開拓新的應(yīng)用，在資源貧乏的診斷和疾病監(jiān)測報告系統(tǒng)。只需要一個單一的高溫加熱塊和一個光電二極管的光檢測系統(tǒng)，BART被設(shè)計用于與等溫核酸擴增的技術(shù)（iNAAT）。它結(jié)合了簡單和堅固的化學和技術(shù)在實時，閉管分析（需要最小的電輸入端和溫度調(diào)節(jié)），和不太苛刻的樣品制備。BART幾個當前可用的系統(tǒng)和其他系統(tǒng)的后期發(fā)展相比具有優(yōu)勢，并可以提高在發(fā)展中國家的艾滋病患者病毒載量監(jiān)測。
BART點關(guān)心分子診斷系統(tǒng)。在分子診斷通常使用的iNAATs，的產(chǎn)生的擴增子以指數(shù)速度。其結(jié)果是，焦磷酸（PPi）的擴增子生產(chǎn)的一種副產(chǎn)物，也產(chǎn)生成倍增長。通過鏈接的指數(shù)生成的焦磷酸，三磷酸腺苷（ATP）的合成，它是可以使用的程度定量擴增通過（參見圖1）發(fā)射的光的熒光素酶報告的螢火蟲熒光素酶的熱穩(wěn)定版本。因為BART技術(shù)如下的過程，而不是絕對測量的濃度的變化率，它是魯棒不同樣品類型和寬容大量的脫氧腺苷三磷酸（的dATP，螢火蟲螢光素酶的底物）和相當數(shù)量的污染ATP的和PPi 11
熱穩(wěn)定的熒光素酶的使用是必不可少的的BART技術(shù)，自大多數(shù)iNAATs操作在在50°至65°C。迄今為止，BART已集成一些基于等溫iNAATs的使用如Bst多DNA聚合酶的鏈置換聚合酶11的某些方法所固有的特異性是如此之高，這是足以跟隨焦磷酸生產(chǎn)推斷的靶分析物特異性擴增。
看出，在熒光的方法中，首先是隨著擴增的進行，隨后迅速下降時，焦磷酸的濃度上升到目前為止發(fā)光的大量增加，成為抑制是非常不同的從BART記者系統(tǒng)的光輸出螢光素酶反應(yīng)（參見圖1）。這種不尋常的性質(zhì)，BART輸出使人們有可能確定結(jié)果已經(jīng)完成，而不需要復(fù)雜或高度敏感的光探測器。達到這個峰值的光發(fā)射所需要的時間是在樣品中的靶核酸的量成反比。因此，BART作用定量時的結(jié)果已經(jīng)顯示出類似的快速PCR系統(tǒng)（參見圖2a和2b）。
BART的優(yōu)點BART試驗可以實時跟蹤，允許定量分析，并在一個封閉的容器格式中進行，從而減少了污染的危險。的BART生物化學裝置的獨特性質(zhì)，結(jié)果可檢測使用一個簡單的光檢測系統(tǒng)（例如，光電二極管），有利于及早檢測和決策不需要一個昂貴的，高靈敏度的光檢測裝置（參見圖3） 。BART技術(shù)已被證明是更寬容的DNA聚合酶用于iNAATs，是一個事實，即以共同抑制劑的影響較小減處理的樣品中，由于。同樣，也可以分析樣品的固有熒光或混濁，這是一個問題的其他方法，
這些特性可讓簡單的協(xié)議，作為一個整體對特定的測試要建立。例如，磁性粒子已被用于特定的捕獲的DNA，也沒有必要從有孔玻璃珠，以洗脫DNA，用PCR擴增，然后再嘗試。相反，可以直接加入珠粒的BART試劑，可以容忍的存在下
磁珠。這種增強的樣品寬容意味著可以簡化樣品制備的優(yōu)勢，在資源有限的環(huán)境和具有挑戰(zhàn)性的物理環(huán)境中（見表二）。
BART是非常適合高通量應(yīng)用，它同樣適用于高度分散的設(shè)置和集中需要高通量技術(shù)的實驗室。硬件也是便攜式電源或電池供電，最終在一個低成本的單位具有占地面積小，可用于在具有挑戰(zhàn)性的環(huán)境，包括非實驗室環(huán)境。在本質(zhì)上，BART的設(shè)計是基于實驗室的分子診斷系統(tǒng)的筆記本電腦相當于（參見圖3）。
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