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		基質(zhì)血紅蛋白量的測量采用反射率測量的總血紅

　　血樣被添加，并通過膜漂洗作為緩沖繼續(xù)流。此緩沖液還包含一個的洗滌劑，hemolyzes紅血細胞，血紅蛋白釋放。在pH6.5，非糖基化和糖基化血紅蛋白的帶正電荷的離子結(jié)合到帶負電荷的基團上的矩陣。此綁定是快速的，并發(fā)生血紅蛋白移動通過矩陣。在pH = 6.5，硼酸酯基團的結(jié)構(gòu)不利于糖化血紅蛋白的結(jié)合，因此，結(jié)合的血紅蛋白作為樣品，將包含相同的糖基血紅蛋白的比例。甲足夠量的緩沖液中加入以除去未結(jié)合的（多余的）從基體中的血紅蛋白。鍵合到基質(zhì)血紅蛋白量的測量是采用反射率測量的總血紅蛋白。光源的LED在標(biāo)稱波長為430納米，使用415納米的血紅蛋白的吸收峰進行定量。

　　第一次測量后，在pH為9.5的緩沖液，加入通過膜漂洗。血紅蛋白的變化，以及離子結(jié)合上的電荷正好相反。有利于結(jié)合的糖基化血紅蛋白的結(jié)構(gòu)，因為它被釋放了，帶負電荷的基團的硼酸酯基團的變化。硼酸酯基團的結(jié)合迅速發(fā)生，血紅蛋白移動通過矩陣。導(dǎo)致血紅蛋白量計量勢必矩陣的

　　糖化血紅蛋白，利用反射測量。這兩個結(jié)合步驟是快速，允許矩陣適于用流水或側(cè)流方法，圖1示出了反射率的變化（％R相對于干燥的帶鋼反射率）作為測定的進展。當(dāng)?shù)谝粋€緩沖區(qū)中加入（1），反射率下降，因為矩陣變得半透明。血后添加（2），反射率下降的高濃度的血紅蛋白通過矩陣移動的前面，吸收光。由于未結(jié)合的血紅蛋白漂洗通過矩陣（3），反射率增加至一平臺，由于在基體中的剩余的離子鍵合的血紅蛋白，是由（A）的反射率測量。當(dāng)添加第二緩沖器（4），反射率開始下降，然后增加，通過矩陣（5）的非糖化血紅蛋白前面的漂洗。的反射率增加的高原，由于殘留在基體中的糖化血紅蛋白，是由所述第二反射率的測量（B）。的兩個反射率的測量（A和B）被用來計算的總量和糖化血紅蛋白的濃度。糖化血紅蛋白與總血紅蛋白的比例是用于計算樣品中的糖化血紅蛋白的％（如下文所述）。

　　所描述的測定法，可以使用2-5μL的樣品進行。膜的厚度和血紅蛋白結(jié)合位點的數(shù)量影響最小樣本量。測試樣品可以是毛細血管，靜脈抽血抗凝（通常EDTA），冷凍抗凝靜脈抽血，和控制。使用原型系統(tǒng)中，第一種緩沖液85微升55微升第二緩沖器是足夠的，以執(zhí)行漂洗。該測定的時間是約5分。加入第一個緩沖區(qū)和閱讀濕片空白后，可允許的延遲時間過長，增加血液太多緩沖區(qū)傳遞，和漂洗將是不完整的。因此，在血液試樣應(yīng)添加的讀取濕條形反射率在15秒內(nèi)。加入第二緩沖器的定時不是關(guān)鍵的。

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