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購買時請注意選擇相應(yīng)的產(chǎn)品名稱

		磺酸基nhs lc生物素是生物技術(shù)獲得的皮爾斯

　　表面功能化粒子和磁性粒子,包括carboxylated和鏈霉親和素改性藍(lán)色粒子(sa bp,0.3?m),從實驗室獲得了劉海。牛血清白蛋白(BSA),β-casein、鏈霉親和素,抗生物素抗體,將鏈霉菌(SG)蛋白酶都買了從西格瑪奧德里奇。磷酸緩沖鹽(PBS;50毫米磷酸鈉,100毫米氯化鈉、pH = 7.2),四硼酸鈉,carbodimide,乙醇胺是購自Polysciences Inc。硝基膜,支持卡,纖維素樣品,和毛細(xì)作用得到微孔公司墊。

　　制備酪蛋白mp。 25毫克的0.35?m磁性粒子(MP)與羧酸表面組與硼酸洗一次,一旦與PBS緩沖。磁性顆粒的分離從上層清液是通過一個磁鐵分離器。洗過的粒子懸浮在1毫升PBS緩沖,和28.8毫克carbodimide在1毫升PBS緩沖是補充道。這種混合物被輕輕地?fù)u動15分鐘。洗四次的粒子與硼酸鹽緩沖(pH = 8.5、0.1米)。

　　洗過的粒子懸浮在1毫升硼酸鹽緩沖,和兩個毫克β-casein在1毫升硼酸鹽緩沖是補充道。由此產(chǎn)生的混合物在室溫下被輕輕地?fù)u動隔夜。粒子被洗了三次水,暫停一毫升乙醇胺溶液在水中50 mM。這種混合物被動搖了30分鐘。粒子與水和洗五次懸浮在2毫升硼酸鹽緩沖。這些粒子將被稱為酪蛋白議員為本文的剩余部分。

　　制備酪蛋白bp。這個過程是一樣的,β-casein共價附件的磁性粒子,除了carboxylated藍(lán)色乳膠粒子(0.3?m)被用來取代carboxylated MP。分離和洗滌被完成的離心分離。這些粒子將被稱為酪蛋白bp為本文的剩余部分。

　　制備生物素酪蛋白mp和生物素酪蛋白bp。 4毫克的酪蛋白議員,或者在300年?l酪蛋白bp,硼酸緩沖被添加到1毫克磺基nhs lc生物素在200?l硼酸鹽緩沖(50毫米,pH = 8.4)。這種混合物被輕輕地?fù)u動四小時,洗五次使用三羥甲基氨基甲烷緩沖液(20毫米,pH = 7.2)。粒子懸浮在1毫升三羥甲基氨基甲烷緩沖液進行存儲并被指定為生物素酪蛋白議員或生物素酪蛋白bp。

　　制備生物素bsa。 500毫克BSA在9毫升硼酸鹽緩沖被添加到300毫克磺基nhs lc生物素在1毫升硼酸鹽緩沖(50毫米,pH = 8.4)。這種混合物被允許的反應(yīng)在室溫下了三個小時。這種混合物被dialyzed五次PBS緩沖。生物素化的BSA的被指定為BSA生物素。

　　我?guī)У闹苽湫汀?一嗨流120硝酸纖維膜在塑料支架卡是條紋與一行5毫克/毫升水中生物素bsa形式捕獲區(qū)即類似的行多熔素溶液(50毫克/毫升)在水是打印到表格捕獲區(qū)二世。所有的分段進行了使用自動售貨機的自動化。印刷的卡片是在37°C干。

　　一種纖維素?zé)粜静牧蠅|層壓到年底,硝化纖維膜,接近捕獲區(qū)二世,一個5毫米重疊。一個共軛墊和一個示例應(yīng)用程序是層壓與側(cè)板的硝酸纖維膜,接近捕獲區(qū)即為共軛墊,一個10厘米長的條玻璃纖維墊材料裝滿了一個解決方案的?l 50的1%,200?l sa bp 20%蔗糖,100?l 2%,和250?l二層20 20毫米三羥甲基氨基甲烷緩沖液(pH = 7.2),其次是在37°C干燥四個小時。信用卡被切成4毫米寬條。

　　II型帶的制備。一嗨流120硝酸纖維膜在塑料支架卡是條紋與一行2毫克/毫升抗生物素抗體在水中形成捕捉帶我和一行多熔素溶液(50毫克/毫升)在水中形成捕獲區(qū)二世。膜是在37°c干一個纖維素?zé)粜静牧蠅|層壓到年底,硝化纖維膜,接近捕獲區(qū)二世,一個5毫米重疊。信用卡被切成4毫米寬條。

　　檢測蛋白酶使用磁性基質(zhì)配合。每個樣本包含80?g六的生物素酪蛋白mp在60?l 20毫米三羥甲基氨基甲烷緩沖液(pH = 7.2)是一個不同的摻入量metalloprotease,從0.02到4.0?g每樣。一個控制樣本包含200的?g metalloprotease停用是包括。樣品在室溫下孵化20分鐘,磁性粒子都被一個磁鐵分離器。 20?l產(chǎn)生的上層清液從每個樣本應(yīng)用于樣品墊的每種類型我裝置。他們將開發(fā)30分鐘(參見圖3)。

　　使用非磁性檢測Metalloprotease襯底配合。 5個樣品,含有0.3?g的生物素酪蛋白bp在40?l 20毫米三羥甲基氨基甲烷緩沖液(pH = 7.2),1%二層20,服用metalloprotease的0至40攝食ng。這些樣品是孵化20分鐘在室溫下。一個II型帶是插入到每個樣品開發(fā)。漫畫是發(fā)達(dá)30分鐘(參見圖5)。

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