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		檢測蛋白酶的側(cè)流試驗(yàn)使用彩色粒子酶

　　一個(gè)橫向流酶分析格式,它使用非議員如顏色或熒光粒子。一種酶底物是共價(jià)標(biāo)記與一個(gè)特定的綁定我(B1)和一個(gè)彩色粒子使一個(gè)襯底共軛。沒有一種酶,粒子被第二粘合劑(B2,B1特有的),是在捕獲帶我上固定一個(gè)II型橫向流裝置來顯示一個(gè)強(qiáng)烈顏色信號。捕獲區(qū)二世應(yīng)該顯示要么沒有信號或弱信號捕獲能力是否捕獲區(qū)我的襯底共軛是超過總額的襯底共軛。

　　在存在一種酶,劈開了襯底,一些或所有的B1將釋放的粒子。發(fā)布的B1可以流的速度比基質(zhì)配合來綁定與B2在捕獲區(qū)I .此外,消化或部分消化底物軛合物將會有更少的B1根;因此,他們將有更少的或沒有可能被捕獲的B2在捕獲區(qū)我產(chǎn)生一個(gè)較弱的信號或無信號。的消化或部分消化底物軛合物通過捕捉帶我而被多熔素在捕獲區(qū)二世來顯示一個(gè)強(qiáng)烈的信號。

　　演示的原理分析格式在圖4中,生物素酪蛋白bp準(zhǔn)備作為襯底共軛對SG metalloprotease從。圖5顯示了開發(fā)測試帶分析樣品中摻入metalloprotease的0至40攝食ng。在缺乏metalloprotease,襯底軛合物捕獲在捕獲區(qū)我的類型我條來顯示一個(gè)強(qiáng)烈的信號。捕獲區(qū)二顯示沒有信號,因?yàn)樗械囊r底軛合物被捕獲在捕獲帶我。

　　在存在0.5 -40 ng的metalloprotease,酶消化底物軛合物釋放一些生物素分子,以便襯底軛合物有少或無生物素根。生物素分子的釋放和生物素根仍然附著在基片配合參加抗生物素抗體在捕獲帶我來產(chǎn)生一個(gè)弱的藍(lán)色信號,而一些消化或部分消化底物軛合物通過捕捉帶我和被束縛在捕獲區(qū)II產(chǎn)生一個(gè)更強(qiáng)的藍(lán)色信號。

　　當(dāng)使用metalloprotease 40 ng的,所有的生物素根被釋放從襯底軛合物,沒有更多的生物素是附加到藍(lán)色粒子。顏色的強(qiáng)度在捕獲區(qū)我的身體非常虛弱,和藍(lán)色的顏色強(qiáng)度在捕獲區(qū)二世是強(qiáng)大的。一般來說,顏色強(qiáng)度的降低,捕獲區(qū)我的顏色強(qiáng)度的捕獲區(qū)二增加的數(shù)量在增加。樣品的蛋白酶

　　圖6。劑量反應(yīng)曲線metalloprotease檢測(Y軸:比例反射率,I2 /(I1 + I2))。

　　顏色強(qiáng)度捕獲區(qū)I和II可以提供半定量或定量測量量的甚至活性酶。反射強(qiáng)度的同時(shí)捕獲區(qū)I和II測量使用一個(gè)內(nèi)部開發(fā)的掃描儀。圖6顯示了反射率的捕獲區(qū)二世(I2)捕獲區(qū)域的總和I和II(I1 + I2)作為一個(gè)函數(shù)的數(shù)量在一個(gè)示例。metalloprotease 劑量反應(yīng)曲線顯示了良好的線性相關(guān)關(guān)系強(qiáng)度和量的反射率蛋白酶前飽和。

　　結(jié)論

　　本文演示了改編的側(cè)流格式檢測活躍的酶。橫向流酶測定技術(shù)保留的所有好處LFIA如簡單,用戶使用方便,成本低。盡管當(dāng)前的研究集中在檢測酶涉及債券劈理,分析技術(shù)可以適用于酶參與債券形成和構(gòu)象異構(gòu)化。除了檢測酶,測定技術(shù)也應(yīng)該用于檢測任何分子物種參與酶反應(yīng),如酶抑制劑。這些技術(shù)應(yīng)該找到各種現(xiàn)實(shí)世界的應(yīng)用,如POC和場外測試陰道酵母菌感染(使用spartyl蛋白酶作為生物標(biāo)志物)和慢性傷口(使用蛋白酶從細(xì)菌病原體作為生物標(biāo)記)。

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