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		生物標(biāo)志物發(fā)展納米技術(shù)為基礎(chǔ)的蛋白質(zhì)檢測

　　最近的臨床研究表明,早期診斷某些疾病的需要更加精準(zhǔn)的檢測相關(guān)的蛋白質(zhì)標(biāo)志物,在濃度存在低于檢測限電流診斷免疫測定技術(shù)。 1、2 例如,最近的一項(xiàng)研究檢查心臟肌鈣蛋白I(心肌肌鈣蛋白I)水平,黃金標(biāo)準(zhǔn)測試用于診斷急性心肌梗塞,證明存在任何檢測心肌肌鈣蛋白I的住院死亡率增加有關(guān)。 3 一個(gè)更敏感的心肌肌鈣蛋白i分析可以使一個(gè)更快速診斷急性心肌梗死和不穩(wěn)定型心絞痛的分化從涵蓋形式的胸痛。 2 之前的研究也表明,診斷前列腺癌根治性前列腺切除術(shù)后復(fù)發(fā)可以方便檢測低水平的前列腺特異抗原(PSA)。 4 - 6

　　與早期診斷,臨床醫(yī)生可以啟動(dòng)適當(dāng)?shù)闹委煵∪?病人預(yù)后早些時(shí)候可能受益。此外,最近的評(píng)估subpicomolar水平的淀粉樣蛋白b派生擴(kuò)散性的配體(ADDL)腦脊液(CSF)使用一種超靈敏的蛋白質(zhì)檢測分析指出潛在的開發(fā)新的試管測試疾病如阿爾茨海默氏癥。 7 由于低濃度ADDL CSF(不到1點(diǎn)),檢測ADDL使用傳統(tǒng)免疫分析檢測腦脊液中格式是不可能的。 7 這一先進(jìn)的檢測靈敏度提供了更多的機(jī)會(huì)去學(xué)習(xí)新的疾病和人血清標(biāo)志物的CSF。

　　Biobarcode化驗(yàn)的

　　最近的一項(xiàng)研究報(bào)道,繼德?biobarcode的化驗(yàn)檢測蛋白質(zhì)的目標(biāo)水平六個(gè)數(shù)量級(jí)低于常規(guī)診斷分析(見圖1)。 8 本試驗(yàn)利用抗體涂層磁珠捕獲和濃縮蛋白的目標(biāo)。捕獲的目標(biāo)都貼有標(biāo)簽的蛋白質(zhì)納米粒子探測器,是coloaded黃金與針對(duì)性的二次抗體和單鏈DNA(ssDNA)或雙鏈DNA(dsDNA)條形碼。由此產(chǎn)生的磁珠目標(biāo)金納米復(fù)合物分離磁和水洗去除過剩探針。 DNA條形碼是釋放復(fù)雜,通過雜交,檢測表面固定化DNA探針和一個(gè)黃金納米顆粒(見寡核苷酸功能化圖1一個(gè) )。 9

　　金顆粒的增大,沉積銀,光散射粒子的檢測與Verigene讀者光學(xué)檢測系統(tǒng)由Nanosphere Inc。(諾斯布魯克,IL)。 10 檢測一個(gè)特定DNA條形碼序列表示一個(gè)特定的蛋白質(zhì)的存在。增加的敏感性是派生的部分從釋放多個(gè)條形碼/捕獲蛋白質(zhì)的目標(biāo)。 8 條碼的數(shù)量釋放取決于大小的金顆粒,直徑15納米金粒子包含100 DNA條形碼。 11 進(jìn)一步提高靈敏度是由探測光散射從銀放大黃金粒子,使檢測的DNA拷貝/ 10000條形碼鑒定。理論分析檢出限是大約100被俘蛋白質(zhì)的目標(biāo)。

　　使用抗體針對(duì)PSA在模型系統(tǒng),本研究報(bào)告的檢測限180份10?PSA(30點(diǎn))的一個(gè)緩沖鹽溶液。 8 biobarcode化驗(yàn)的也被檢查以檢測其他蛋白質(zhì)的目標(biāo)包括ADDL腦脊液中,一個(gè)潛在的可溶性致病性標(biāo)記為阿爾茨海默氏癥。 7 在一項(xiàng)30患者樣本,臨床相關(guān)的濃度檢測腦脊液中ADDL使用biobarcode化驗(yàn)。此外,多路復(fù)用化驗(yàn)出了癌癥標(biāo)記物,包括蛋白質(zhì)PSA,人類絨毛膜促性腺激素(一個(gè)睪丸癌標(biāo)記)和甲胎蛋白(一種肝細(xì)胞癌標(biāo)記)。 12 多路復(fù)用的化驗(yàn)使用不同的DNA條形碼序列與標(biāo)記特定的抗體coloaded每個(gè)金探針作為指標(biāo)對(duì)不同的蛋白標(biāo)記物。

　　最近的一個(gè)調(diào)查,描述了一個(gè)替代方法來標(biāo)記蛋白質(zhì)的目標(biāo)捕獲到抗體涂層后的磁珠。 13 代替一個(gè)coloaded黃金粒子,這種方法利用一個(gè)生物素化的二次抗體標(biāo)記與鏈霉親和素涂覆金納米粒子和生物素化的ssDNA條形碼(見圖1 b )。一旦ssDNA條形碼被免除復(fù)雜,DNA被檢測到上述coloaded探針格式(見圖1 )。使用生物素鏈霉親和素的方法,絕對(duì)的檢測極限0.01 pg / ml PSA(10成品/毫升,大約300點(diǎn)濃度)是實(shí)現(xiàn)一個(gè)優(yōu)秀的劑量響應(yīng)在磷酸緩沖鹽。 13 鑒于等效親和力的抗體,這種檢測格式可用于其它臨床相關(guān)的蛋白質(zhì)標(biāo)志物。

　　先前報(bào)告的分析結(jié)果biobarcode PSA使用模擬樣本,包括游離PSA飆升到磷酸緩沖鹽的解決方案包含洗滌劑和/或牛血清白蛋白。這項(xiàng)研究的目標(biāo)是測量檢測?限制的生物素鏈霉親和素biobarcode化驗(yàn)使用總PSA(tPSA)飆升到人類血清樣品,并比較它與商用檢測平臺(tái)。在病人血清和前列腺癌,約90%的PSA相關(guān)antichymotrypsin(ACT),以形成一個(gè)PSA法復(fù)雜,其余10%是免費(fèi)的詩篇。

　　援助在標(biāo)準(zhǔn)化測試結(jié)果,世界衛(wèi)生組織(世衛(wèi)組織,日內(nèi)瓦)開發(fā)了一個(gè)總PSA標(biāo)準(zhǔn)(NIBSC、代碼96/670),由90%和10%免費(fèi)PSA法復(fù)雜PSA來模擬疾病狀態(tài)。這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)是用于研究上面所討論的。兩種形式的PSA同樣可以被選中的PSA抗體對(duì)用于這項(xiàng)研究。 13 此外,內(nèi)生PSA水平以女性血清和一組系列樣品的男人,經(jīng)歷了根治性前列腺切除術(shù)和/或救助放療為了評(píng)估的效用分析使用臨床樣本

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