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		免疫熒光技術(shù)是以熒光色素標(biāo)記抗體或抗原

免疫熒光技術(shù)是以熒光色素標(biāo)記抗體或抗原，使之與相應(yīng)的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合，并借助于熒光顯微鏡觀察產(chǎn)生熒光的抗原抗體反應(yīng)。在實際工作中常以熒光色素標(biāo)記抗體，故又稱熒光抗體法。由于本法具有快速、敏感的特點，已廣泛用于病毒學(xué)、細菌學(xué)、免疫學(xué)及環(huán)境學(xué)各個方面。
    (1)原理  熒光色素是一種染料，它本身不發(fā)光，但能在紫外線或藍紫光照射下，能吸收光量子而激發(fā)能量，發(fā)出較激發(fā)光的波長更長的熒光。當(dāng)色素與抗體結(jié)合后，熒光特性不改變，被結(jié)合后的抗體其免疫學(xué)特性也不改變。因此，可借熒光顯微鏡檢查熒光的產(chǎn)生來確定抗原抗體反應(yīng)。
    (2)方法  熒光抗體染色的基本方法有三種類型。
    ①直接法  熒光色素標(biāo)記于特異抗體上，直接檢查未知抗原，如待檢物為相應(yīng)抗原，則可形成熒光色素抗體和抗原的復(fù)合物。
    ②間接法  將未知抗原先加未標(biāo)記的已知特異抗體，再加標(biāo)記熒光色素的抗免疫球蛋白抗體(抗抗體)。如待檢物為相應(yīng)抗原，與未標(biāo)記的已知特異抗體結(jié)合后，則熒光素標(biāo)記的抗免疫球蛋白抗體與上述結(jié)合物中的特異抗體相結(jié)合形成抗原抗體熒光抗免疫球蛋白抗體復(fù)合物。間接法中有兩對抗原抗體系統(tǒng)，即待檢抗原與未標(biāo)記的特異抗體和未標(biāo)記的特異抗體與標(biāo)記熒光色素抗免疫球蛋白抗體。故此法又稱雙抗體法。
    ③補體法  補體具有能結(jié)合在任何免疫復(fù)合物上的特性。故當(dāng)未標(biāo)記特異抗體與待檢抗原反應(yīng)后，加補體使其結(jié)合，再加熒光素標(biāo)記抗補體抗體，形成抗原-抗體-補體-熒光標(biāo)記抗補體抗體大分子復(fù)合物。
    上述三法中，直接法最為特異，但一種標(biāo)記抗體只能測定一種相應(yīng)抗原，故每檢查一種抗原必須制備與其相應(yīng)的標(biāo)記抗體;間接法比直接法敏感10～40倍，標(biāo)記一種抗免疫球蛋白抗體能檢查多種抗原抗體系統(tǒng)，但方法較麻煩，干擾因素較多；補體法更為敏感，一種熒光抗補體抗體，可檢查多種抗原抗體系統(tǒng)，且不受免疫血清來源的動物種屬限制，但非特異性反應(yīng)也多，方法較繁。

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