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| 可溶性抗原與相應(yīng)抗體直接反應(yīng)不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象 | |||||||||||
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| 可溶性抗原與相應(yīng)抗體直接反應(yīng)不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象。將可溶性抗原包被在一種與免疫無關(guān)的顆粒狀載體表面形成致敏顆粒，再與相應(yīng)抗體反應(yīng)，則出現(xiàn)凝集稱間接凝集反應(yīng)。常用的載體顆粒有人 O 型紅細胞、綿羊紅細胞、乳膠顆粒等。如載體顆粒是紅細胞，稱間接血凝試驗；若為乳膠顆粒，則稱為乳膠凝集試驗。 將可溶性抗原吸附于一種與免疫無關(guān)的顆粒載體上，然后與相應(yīng)的抗體結(jié)合，也可出現(xiàn)顆粒載體的凝集現(xiàn)象，稱為間接凝集反應(yīng)。間接凝集反應(yīng)比直接凝集反應(yīng)敏感性為高，可用于微量抗體或抗原的檢查。 間接血球凝集試驗是根據(jù)紅細胞表面的吸附作用而建立起來的。將細菌可溶性抗原提出，使之吸附于紅細胞表面，此時紅細胞即稱為“致敏紅細胞”。這種致敏的紅細胞具有細菌的抗原性，與相應(yīng)的抗血清相遇可產(chǎn)生凝集現(xiàn)象。 間接血凝抗原的制備可用加堿或加熱的方法使菌體中的多糖物質(zhì)浸出，去除類脂，以免干擾紅細胞的吸附作用。但如果是蛋白質(zhì)時，則用來吸附的紅細胞需 先用鞣酸予以處理。 方法如下。 ①O抗原的制備將每毫升100 億的傷寒桿菌O菌懸液，置l00℃水浴中2h，離心沉淀吸取上清液，分裝無菌試管，放4℃冰箱備用。 ②致敏紅細胞懸液制備 取一定稀釋度的抗原加等量2.5％綿羊紅細胞懸液，混合后放37℃水浴箱中，每隔15min取出振搖一次，共經(jīng)2h。然后取出，用生理鹽水洗滌3次，而配制成0.5％懸液即成。 ③試驗步驟 a.小試管9只標好號碼于試管架上。 b．第l管加入0.9mL 生理鹽水，其余各管各加入0.5mL 。 c．以吸管吸取已加熱滅菌的免疫血清0.1mL加入第1管，混勻后吸取0.5mL注入第2管，同樣第2管的血清與鹽水混勻后吸取0.5mL注入第3管。如此依次稀釋直至第8管。自第8管吸出O.5mL 棄去。第9管不加血清作對照。 d．于每管加入0.5mL已經(jīng)致敏的0.5％綿羊紅細胞懸液，混勻后放入37℃水浴中，2h后觀察結(jié)果。凡最高血清稀釋度的免疫血清試管中呈現(xiàn)完全血凝者，即為該血清的間接血清效價。 間接凝集反應(yīng)具有敏感性高、快速、簡便等優(yōu)點，在臨床上得到廣泛的應(yīng)用。如用乳膠凝集試驗測定相關(guān)抗體，可用于輔助診斷鉤體病、血吸蟲病、類風濕性關(guān)節(jié)炎等。此外，用反相間接凝集試驗測定抗原可做疾病早期診斷，如檢測血清中的乙型肝炎表面抗原 (HBsAg) 及甲胎蛋白 (AFP) 等。 |
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