亚洲网国产,爱爱视频天天看,一级日逼片,99这里只有精品视频,美女操逼网,美女张开腿让男人捅视频,日韩精品一区二区三区四虎视频,日日干视频

購(gòu)買時(shí)請(qǐng)注意選擇相應(yīng)的產(chǎn)品名稱

		隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA技術(shù)顯著的優(yōu)點(diǎn)

　RAPD，即隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA技術(shù)，是由美國(guó)科學(xué)家Wiliams和Welsh于1990年分別研究提出的，又稱任意引物PCR。它的應(yīng)用是基于這樣的一個(gè)推理：對(duì)于同一模板DNA，用同一引物擴(kuò)增既可能得到相同的帶譜（模板基因組間可能具有同源性），也可能得到不同的帶譜。僅在某一特定模板中出現(xiàn)的條帶就可作為該模板的分子標(biāo)記。事實(shí)上，不同基因組DNA總是一定差異的，所以用RAPD就可以進(jìn)行分子標(biāo)記研究。理論上講，在一定的擴(kuò)增條件下，擴(kuò)增的條帶數(shù)取決于基因組的復(fù)雜性。對(duì)特定的引物，復(fù)雜性越高的基因組所產(chǎn)生的擴(kuò)增條帶數(shù)也越多。90年代前期RAPD技術(shù)得到廣泛的應(yīng)用，幾乎所有的作物都有這方面的研究報(bào)告。但隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)該技術(shù)存在一定的缺陷，并對(duì)此作了一些探索。RAPD技術(shù)目前運(yùn)用相當(dāng)廣泛，幾乎滲透于整個(gè)基因組研究的各個(gè)方面，這與它所具有的眾多優(yōu)勢(shì)是分不開的。
RAPD顯著的優(yōu)點(diǎn)：在對(duì)基因組序列一無所知的情況下分析微生物DNA的多態(tài)性；方法簡(jiǎn)單快速和高度的重復(fù)性使其很快普及應(yīng)用。
    其原理為：采用核苷酸序列的隨機(jī)引物進(jìn)行基因組DNA擴(kuò)增，非特異性引物可以結(jié)合在模板DNA的多個(gè)位點(diǎn)，產(chǎn)生多個(gè)PCR產(chǎn)物，采用瓊脂糖凝膠電泳將產(chǎn)物分離開，將每株菌在每條引物下擴(kuò)增后產(chǎn)生的圖譜合成為針對(duì)一株菌的單一圖譜，再通過軟件進(jìn)行分析。
    方法上基本分三個(gè)步驟：①基因組DNA的制備；②PCR引物的選擇和AP-PCR；③聚丙烯酰胺凝膠電泳或瓊脂糖凝膠電泳分離AP-PCR產(chǎn)物。
    (1)模板DNA的制備  RAPD只需要極少量的DNA作模板，對(duì)DNA提取的質(zhì)量要求也不高，一般通過酚/氯仿提取即可。模板量從25pg～l0ng均可以觀察到多態(tài)性帶。這為那些還無法離體培養(yǎng)大量繁殖的物種的分子標(biāo)記提供了可能。
    (2)隨機(jī)引物的選擇  研究物種不同，對(duì)引物并無要求。根據(jù)生產(chǎn)廠家、(G+C)含量不同等分成多個(gè)序列。高(G+C)含量的引物擴(kuò)增譜帶是其他引物的2倍多，但多態(tài)性的分子標(biāo)記結(jié)果是一樣的。
    (3)影響AP--PCR的關(guān)鍵技術(shù)因素
    ①PCR的退火溫度可能影響帶譜的特異性和重復(fù)性，但其影響程度取決于引物的長(zhǎng)度。引物長(zhǎng)時(shí)影響不大，可使用高溫退火；引物短時(shí)影響大，因而退火溫度要低，以保證引物與模板的結(jié)合。②模板的濃度對(duì)PCR產(chǎn)物有影響，DNA的模板濃度以30pg～7.5ng為宜，10pg是低限。③AP-PCR引物不需特異選擇，尤其當(dāng)用于種的鑒定時(shí)，但不同序列的引物擴(kuò)增的PCR多態(tài)性不同，尤其是種或株特異性的DNA片段。
　　RAPD技術(shù)簡(jiǎn)便易行、省時(shí)省力，不需要RFLP分析的預(yù)備性工作：如克隆的制備、同位素標(biāo)記、Southern印記反應(yīng)及分子雜交。RAPD易于程序化，利用一套隨機(jī)引物可得到大量的分子標(biāo)記，并可借助于計(jì)算機(jī)系統(tǒng)進(jìn)行分析；⑤RAPD分析所需的DNA樣品量極少，僅為RFLP的1ö1000-1ö200，這對(duì)于生物早期取樣鑒定或在DNA受限制的情況下是十分有利的。

上一篇：可溶性抗原與相應(yīng)抗體直接反應(yīng)不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象		下一篇：協(xié)同凝集試驗(yàn)與間接凝集反應(yīng)的原理相類似