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		協(xié)同凝集試驗(yàn)與間接凝集反應(yīng)的原理相類似

金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁上的A蛋白(SPA)，具有和大多數(shù)哺乳動物IgG的Fc片段發(fā)生非特異性結(jié)合的特性，而IgG的Fab片段暴露在菌體的表面，仍保持抗體的活性，當(dāng)與特異性抗原相遇時(shí)，IgG的Fab片段便與抗原結(jié)合起來，從而由抗原把已標(biāo)記有IgG的SPA菌相互連接，而引起協(xié)同凝集反應(yīng)。其特點(diǎn)是既保持了標(biāo)記抗體的特異性，又提高了抗體的敏感性。含A蛋白的金黃色葡萄球菌在反應(yīng)中起到載體和“放大器”的作用在凝集反應(yīng)中，金黃色葡萄球菌菌體成了IgG抗體的載體，稱為協(xié)同凝集反應(yīng)。本反應(yīng)也可用于檢測微量抗原。標(biāo)準(zhǔn)品

方法如下：

(1) 10％葡萄球菌菌懸液的制備 CoWanl株葡萄球菌接種于柯氏瓶，37℃培養(yǎng)18～24h，用PBS洗下菌苔，2500r／min離心20min。沉淀菌用PBS洗2次后，用0.5％甲醛(用PBS配置)在室溫中固定3h。置于80℃水浴中4min以破壞菌體的自源性分解酶。再用PBS洗滌2次后配成10％菌懸液。

(2) 致敏葡萄球菌 1mL10％的菌懸液加0.1mL，傷寒桿菌O抗血清充分混合，放人37℃水浴中30min (中間需搖動2次)。取出后經(jīng)2500r／min離心20min，棄去上清液，沉淀菌用PBS洗滌2次后配成10％菌懸液。

(3) 協(xié)同凝集試驗(yàn)

①取傷寒桿菌O可溶性抗原一滴致敏葡萄球菌菌懸液，一滴在載玻片上混勻，觀察約2min。一般在幾秒鐘內(nèi)即可發(fā)生凝集。

②滴一滴致敏葡萄球菌菌懸液于玻片上，用接種環(huán)取傷寒桿菌O菌培養(yǎng)物少許置于懸液中，使成均勻孔狀，觀察約2min，記錄有無凝集。

③用傷寒桿菌。菌培養(yǎng)物與未致敏的葡萄球菌菌液或用痢疾桿菌培養(yǎng)物與致敏的葡萄球菌菌液做玻片凝集，均為陰性反應(yīng)，不出現(xiàn)凝集。

金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁成分中的A蛋白能與人及多種哺乳動物(豬、兔、羊、鼠等)血清中IgG 類抗體的Fc段結(jié)合。IgG的Fc段與SpA結(jié)合后，兩個(gè)Fab段暴露在金黃色葡萄球菌菌體表面，仍保持其抗體活性和特異性，當(dāng)其與特異性抗原相遇時(shí)，也出現(xiàn)特異凝集現(xiàn)象。

協(xié)同凝集試驗(yàn)與間接凝集反應(yīng)的原理相類似，但所用的載體為金黃色葡萄球菌。這種細(xì)菌的細(xì)胞壁中含有A蛋白（SPA），SPA 能與特異性抗體IgG 的Fc段結(jié)合（IgG3除外）醫(yī)學(xué)教`育網(wǎng)搜集整理。抗體的F（abˊ）2 段暴露在葡萄球菌的表面，仍保持與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合的特性。當(dāng)這種葡萄球菌與IgG抗體連接時(shí)，就成為抗體致敏的載體顆粒，若與相應(yīng)抗原接觸，即出現(xiàn)反向間接凝集反應(yīng)?？捎糜诩?xì)菌、病毒、毒素及各種可溶性抗原的檢測。

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