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| 聚乙二醇化重組人生長激素延長作用時間的藥物 | |||||||||||
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聚乙二醇化重組人生長激素（PEG-rhGH）雖然是建立在rhGH上的以延長體內(nèi)作用時間為目的的藥物，但是由于PEG的引入，使得改構(gòu)后蛋白質(zhì)在理化性質(zhì)、體內(nèi)體外活性上的復雜程度，都遠遠超出rhGH。重組人生長激素(Recombinant human growth hormone, rhGH)是由大腸桿菌或酵母菌表達的一種重要的非糖基化蛋白質(zhì)激素，由191個氨基酸殘基組成，相對分子量為22,125，等電點為5.2。臨床上，rhGH主要用于治療因內(nèi)源性hGH缺乏而導致的兒童侏儒癥、成人生長激素缺乏癥等[1]。由于其體內(nèi)半衰期僅為0.5~2hr左右，故需要每天、長期注射才能發(fā)揮療效，治療周期往往為一年以上[2]。聚乙二醇（Polyethylene glycols, PEG）www.52lvdd.cn是一種毒性極低的線性大分子聚合物，具有水溶性和免疫惰性。蛋白類藥物經(jīng)PEG修飾后，可延長半衰期，增加穩(wěn)定性，同時降低免疫原性和抗原性[3]。2008年，第一個N端被枝杈型PEG修飾的rhGH進入臨床試驗[4]。雖然未發(fā)現(xiàn)嚴重不良反應且無抗PEG-rhGH的特異抗體產(chǎn)生，該產(chǎn)品卻因為在二期臨床試驗中觀察到注射部位出現(xiàn)皮下脂肪萎縮而被終止臨床研究。目前，國內(nèi)已有3家企業(yè)申報了3種PEG-rhGH注射液，其中一家企業(yè)已取得了臨床批件。
雖然PEG-rhGH是在已收載于中國藥典2010年版的比較成熟的重組人生長激素基礎(chǔ)上進行研發(fā)的，但是，其質(zhì)量標準中各項目及限度的制定不應簡單地照搬rhGH的標準，還應結(jié)合其自身獨特的理化結(jié)構(gòu)性質(zhì)及生物學活性，著重考慮PEG有關(guān)的質(zhì)控項目。
1996年，美國Genentech公司的Clark等人利用分子量為5kDa的聚乙二醇（PEG），對重組人生長激素進行了長效改構(gòu)研究[5]。研究結(jié)果表明，偶聯(lián)后的重組人生長激素隨著PEG偶聯(lián)數(shù)目的增多，其體內(nèi)半衰期也相應延長，但其與受體結(jié)合的活性及體內(nèi)刺激大鼠脛骨增殖的活性卻隨著偶聯(lián)數(shù)目的增加而急劇下降。本文由對照品網(wǎng)整理提供同時，rhGH上可發(fā)生PEG修飾的10個位點中，有4個位點處于rhGH與受體的結(jié)合部位，直接影響著rhGH的活性。因此，每個rhGH分子究竟結(jié)合了幾個PEG？這些PEG究竟結(jié)合在rhGH的哪些位點上？與這兩個問題密切相關(guān)的兩個指標——PEG對rhGH的平均修飾率與PEG在rhGH上的修飾位點就成為該類產(chǎn)品的重要質(zhì)控指標與質(zhì)控難點。
目前尚無國外產(chǎn)品的質(zhì)量標準可供參考，國內(nèi)企業(yè)與此相關(guān)的質(zhì)控技術(shù)還有待于進一步完善。本文即從這兩個質(zhì)控關(guān)鍵技術(shù)進行討論，并對質(zhì)量標準制定中一些需重點關(guān)注之處進行說明。
目前，PEG修飾蛋白的質(zhì)量標準中平均修飾率的檢測方法主要有：三硝基苯磺酸（TNBS）法、熒光胺法、質(zhì)譜法、液相-示差/蒸發(fā)光檢測器聯(lián)用法等。其中，前兩種為間接測定法，要求對修飾前后的蛋白質(zhì)準確定量。該類方法屬普通的化學與熒光發(fā)光法，操作相對簡單；后兩種屬于直接測定法，雖然結(jié)果較為準確，但所用儀器較為特殊或昂貴。因此，建立質(zhì)量標準時，應考慮采用直接法獲得較為可靠的平均修飾率數(shù)值，隨后建立三硝基苯磺酸（TNBS）法或熒光胺法而納入標準。同時，如能成功建立直接法中的“液相-示差/蒸發(fā)光檢測器聯(lián)用法”，不僅可以準確控制單位點或多位點修飾的PEG-rhGH的平均修飾率，還可以同時進行游離PEG測定，以及PEG的定性鑒別。本文由對照品網(wǎng)整理提供如涉及文章版權(quán)問題請聯(lián)系作者刪除，文章轉(zhuǎn)載請注明地址：www.52lvdd.cn
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