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		生物素化的堿性磷酸酶的大分子酶法測定

　　可能的含量戰(zhàn)略設(shè)計(jì)這種類型的固體支持物的結(jié)合容量測定的根本原因是為了簡化后續(xù)的配體附著到微球體。我們的想法是要綁定的類似的尺寸和重量的配位體，將用于最終的應(yīng)用程序的標(biāo)記。使用這個號碼作為指引的最終偶聯(lián)反應(yīng)消除后猜測合適的試劑的使用。試劑的使用效率有所提高這方面的能力是生物素 - 鏈霉抗生物素蛋白偶聯(lián)的策略比傳統(tǒng)的共價偶聯(lián)的協(xié)議，在免疫分析和分子生物學(xué)應(yīng)用正變得越來越流行的原因之一。

　表中。鏈霉親和素包被的磁性微球的特性的不同的結(jié)合能力的測定格式。在制定相應(yīng)的檢測策略，適合不同大小的配體的檢測和實(shí)用的手段應(yīng)予以考慮。表II列出了四個廣泛使用的檢測方法，以及為每個共同標(biāo)記。圖1中所示的相應(yīng)的反應(yīng)方案。

　　圖1?；镜慕Y(jié)合容量的測定策略：（一）使用生物素化的堿性磷酸酶的大分子酶法測定，其分子量（MW）約140,000;（二）小分子的熒光測定用生物素標(biāo)記的熒光素異硫氰酸酯（分子量?633）;（三）小分子化學(xué)發(fā)光檢測用生物素吖啶（MW?877）及（d）純素放射性檢測使用氚生物素（MW?247）。

　　四種常用的檢測手段，在至少最敏感的順序，是放射性的（RIA），酶聯(lián)（EIA），熒光（FIA），化學(xué)發(fā)光免疫測定（CLIA）。1，雖然基于熒光免疫測定法是相當(dāng)敏感，它們可以是有問題的。雖然我們最初的工作涉及這種類型的試驗(yàn)，我們不再使用它，因?yàn)楸匾脑O(shè)備，以獲得最佳的檢測（熒光計(jì)）是不容易獲得。此外，很難使用FITC-標(biāo)記的一個共同的熒光標(biāo)記，生物素，它限制了作為一個主要的結(jié)合容量的測定使用。這些困難包括一個事實(shí)，即，經(jīng)FITC標(biāo)記的生物素是不穩(wěn)定的，而且，它很難溶解在水懸浮液中。由于這些原因，這種方法是從下面的分析描述省略。

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