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		鏈霉抗生物素蛋白的結(jié)合容量的測(cè)定使用

　　放射性氚含量：生物素最早的類型的鏈霉抗生物素蛋白的結(jié)合容量的測(cè)定使用125 I-，14 C-或3 H-標(biāo)記的生物素作為示蹤劑。由于這些化驗(yàn)簡(jiǎn)單，他們?nèi)匀槐粡V泛使用的今天。放射性物質(zhì)的比其他的檢測(cè)手段具有一些明顯的優(yōu)勢(shì)，因?yàn)樗鼤?huì)導(dǎo)致只有很輕微的變化的標(biāo)記抗原（一個(gè)氚標(biāo)記的生物素作為非放射性的生物素分子的大小具有相同的）的結(jié)構(gòu)，容易量化，并且是簡(jiǎn)單的檢測(cè)。2，這使得這些材料的使用非常方便的小分子的結(jié)合反應(yīng)的研究。此外，一個(gè)大的生物素化的分子可以被放射性標(biāo)記的，很容易地確定為較高分子量的配位體，如免疫球蛋白鏈霉親和素包被的微球的結(jié)合能力。然而，決定使用一個(gè)看似簡(jiǎn)單的放射性檢測(cè)作為主要的生物素結(jié)合容量檢測(cè)之前，用戶應(yīng)該考慮低比活動(dòng)等復(fù)雜因素，甚至125 I標(biāo)記分子的不穩(wěn)定性質(zhì)一些放射性修改分子;使用這種測(cè)試所涉及的監(jiān)管壓力和約束，需要專門的檢測(cè)設(shè)備。

　　有兩種常用的方法，這種類型的測(cè)定。第一種方法是用過(guò)量的放射性標(biāo)記的生物素結(jié)合能力計(jì)算中孵育不同量的微球。也許更常見的方法是用一定量的微球生成Scatchard圖孵育不同量的放射性生??物素。一個(gè)版本的Scatchard圖是典型的方法進(jìn)行定量細(xì)胞表面上的受體數(shù)（即，結(jié)合位點(diǎn)），因此，可以進(jìn)行修改，用于quantifiying的微球表面上的結(jié)合位點(diǎn)的數(shù)目（請(qǐng)參閱圖2）。我們的方法，以該測(cè)定孵育不同量恒定量的氚標(biāo)記的生物素與鏈霉親和素包被的磁性微球，總是在過(guò)量的生物素結(jié)合位點(diǎn)上的微球的化學(xué)計(jì)量計(jì)算的數(shù)。微球，然后水洗，并直接從微球中，用閃爍計(jì)數(shù)測(cè)定放射活性。實(shí)際的結(jié)合能力是一個(gè)轉(zhuǎn)換為每分鐘的計(jì)數(shù)除以計(jì)數(shù)增加每分鐘的總生物素結(jié)合的生物素的分?jǐn)?shù)。氚標(biāo)記的生物素活性的更精確的測(cè)量，可以檢查運(yùn)行檢測(cè)上清液每分鐘的計(jì)數(shù)，確保這個(gè)計(jì)數(shù)，再加上，微球，加起來(lái)為原體積的氚標(biāo)記的生物素的每分鐘計(jì)數(shù)。實(shí)施例的Scatchard圖，通常用于定量細(xì)胞表面上的受體的數(shù)量。放射性氚含量

　　當(dāng)測(cè)量放射性的鏈霉親和素包被的磁性微球的結(jié)合能力時(shí)，我們遇到了一些有趣的考慮因素。我們發(fā)現(xiàn)，提供更廣泛的基微球大小分布，如磁性粒子由幾個(gè)主要供應(yīng)商，可導(dǎo)致不準(zhǔn)確和低結(jié)合容量值。據(jù)認(rèn)為，這是由于“罰款，”或更小的顆粒，不拉磁鐵在相同的時(shí)間量作為微球的主要種群。這些罰款理論上可與生物素結(jié)合，但不能檢測(cè)到閃爍計(jì)數(shù)微球顆粒，從而降低表觀結(jié)合容量。解決這個(gè)誤差源的方法之一是使用一個(gè)更強(qiáng)大的磁鐵，有能力拉微球有一個(gè)較低的量的氧化鐵，是罰款的情況。

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