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		化學(xué)發(fā)光法：生物素吖啶

　　化學(xué)發(fā)光法是化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生可見(jiàn)光，因此不使用任何光源。因此，需要復(fù)雜和低效的光波長(zhǎng)的濾波系統(tǒng)被淘汰。化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)分為兩類(lèi)。第一個(gè)和最簡(jiǎn)單的開(kāi)發(fā)使用酶產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光信號(hào)。通常情況下，無(wú)論是辣根過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶，標(biāo)簽被觸發(fā)時(shí)通過(guò)加入底物，酶系統(tǒng)的影響下，會(huì)引起一個(gè)可見(jiàn)的排放。這種類(lèi)型的信號(hào)增強(qiáng)，使研究人員能夠開(kāi)發(fā)綁定容量檢測(cè)，更快，更敏感，比任何傳統(tǒng)的比色或放射性檢測(cè)。

　　其他化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)使用一個(gè)的非酶促直接化學(xué)發(fā)光標(biāo)記。直接標(biāo)簽往往酶系統(tǒng)相比具有較低的背景信號(hào)，并且通常非?？焖俚禺a(chǎn)生一個(gè)信號(hào)。與吖啶酯系統(tǒng)的免疫學(xué)的結(jié)合和隨后的洗滌步驟后，該信號(hào)需要開(kāi)發(fā)只有2秒，比30分鐘或更長(zhǎng)的時(shí)間的酶生成的系統(tǒng)（參見(jiàn)圖）。圖。吖啶? 2 HNS酯（分子量632.55）可生物素化，并用于開(kāi)發(fā)一種快速，靈敏的小分子生物素結(jié)合法。

　　在今天的實(shí)驗(yàn)室，用來(lái)檢測(cè)化學(xué)發(fā)光光度計(jì)已經(jīng)變得越來(lái)越普遍，化學(xué)發(fā)光鏈霉親和素包被的磁性微球的定量分析結(jié)合實(shí)驗(yàn)的興趣有所增加。增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法的優(yōu)點(diǎn)在于，提供了超過(guò)比色酶，熒光或放射性測(cè)定的靈敏度。當(dāng)開(kāi)發(fā)一個(gè)特定的鏈霉親和素包被的磁性顆粒的結(jié)合容量的測(cè)定，是特別有益的，化學(xué)發(fā)光的和放射性的檢測(cè)是唯一的，可以讀取的格式在無(wú)干擾的微球顆粒本身的存在。

　　這種新的方法來(lái)制定有約束力的容量檢測(cè)攜帶劣勢(shì)。與更常規(guī)的EIA，RIA，F(xiàn)IA的方法，良好的特點(diǎn)是能夠被生物素化的化學(xué)發(fā)光酯的商業(yè)可用的不同是有限的。分別為這不是的情況下，本文由對(duì)照品網(wǎng)收集整理提供可以運(yùn)行孵育微球的化學(xué)發(fā)光酯與直接結(jié)合容量的測(cè)定，用光度計(jì)測(cè)量所發(fā)出的一定濃度的微球的相對(duì)光單位（RLUs），然后轉(zhuǎn)換到實(shí)際的綁定根據(jù)RLUs發(fā)出了由一個(gè)化學(xué)發(fā)光分子的數(shù)量。因?yàn)樗?，化學(xué)發(fā)光酯可以被生物素化并純化。然而，除非精確地知道在一個(gè)給定的樣本中的濃度吖啶，有必要開(kāi)發(fā)測(cè)定使用的間接格式。

　　有了這個(gè)障礙，這種的方法進(jìn)行第一水浸微球與游離生物素，洗滌，加入生物素化吖啶（B-ACR）的濃度恒定，再洗（參見(jiàn)圖4）。這就確保了，基于來(lái)自于化學(xué)計(jì)量數(shù)量的組的所有的鏈霉抗生物素蛋白上的結(jié)合位點(diǎn)被占用的游離生物素的鏈霉抗生物素蛋白結(jié)合，基體顆?？捎糜诘味ǖ?。這是用來(lái)作為發(fā)光檢測(cè)儀上的“空白”，是因?yàn)槿魏谓o定的信號(hào)關(guān)閉吖啶酯（疏水性的分子）的非特異性結(jié)合的疏水性微球的暴露的表面。優(yōu)化在測(cè)定中使用的阻滯劑或更劇烈的洗滌步驟是必要的，以降低這個(gè)值接近零。圖。增加化學(xué)發(fā)光信號(hào)，光度計(jì)讀取結(jié)果時(shí)，較低濃度的游離生物素的存在下加入了一定量的生物素化的吖啶。

然后，我們連續(xù)稀釋游離生物素，并培養(yǎng)這與以前使用的B-ACR相同的恒定濃度，鏈霉親和素包被的磁性微球。作為洗滌后的粒子的發(fā)光信號(hào)增加，這是處于打開(kāi)狀態(tài)的結(jié)合生物素化的吖啶免費(fèi)網(wǎng)站的數(shù)目的指示。稀釋液進(jìn)行完成一個(gè)S形的結(jié)合曲線(xiàn)，表示更高的精確度變窄（參見(jiàn)圖4）的曲線(xiàn)最陡的部分與稀釋液。最后，因?yàn)楹茈y確定一個(gè)直接點(diǎn)在曲線(xiàn)上，以評(píng)估最大結(jié)合，我們的理由是，用最陡的斜率的曲線(xiàn)上的點(diǎn)可以被認(rèn)為是在當(dāng)量點(diǎn)（帶的鏈霉抗生物素蛋白生物素所占據(jù)的結(jié)合位點(diǎn)的一半，B-ACR的一半），并且這個(gè)值乘以2給出一個(gè)確切的結(jié)合容量值，B-ACR。本文由對(duì)照品網(wǎng)收集整理提供轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明來(lái)源：www.52lvdd.cn

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